Vzorec lahko tudi razsolite z ultrafiltracijo na 1 desetino prejšnjega volumna, ki ga ponovno razredčite in ponovite korak UF. Najboljša metoda za razsoljevanje je razsoljevanje z gel filtracijo proti 50 mM pufru, kot ultrafiltracija (klasična, ne centrifugalna).
Kaj je razsoljevanje pri čiščenju beljakovin?
Razsoljevanje se uporablja za odstranjevanje soli iz beljakovinskih raztopin, fenola ali nevgrajenih nukleotidov iz nukleinskih kislin ali presežnih reagentov za zamreženje ali označevanje iz konjugiranih beljakovin.
Kako očistite beljakovine?
Pri čiščenju beljakovin v razsutem stanju je običajen prvi korak za izolacijo beljakovin precipitacija z amonijevim sulfatom (NH4) 2SO4. To se izvede z dodajanjem vedno večjih količin amonijevega sulfata in zbiranjem različnih frakcij oborjenih beljakovin. Nato lahko amonijev sulfat odstranimo z dializo.
Kako izvajate pufersko izmenjavo beljakovin?
Izmenjava pufra pa se izvede s prvim ekvilibriranjem s kolonsko smolo s pufrom, v katerem bi moral končati vzorec. V obeh primerih se sestavine pufra, ki nosijo vzorec v stolpec bo nadomestila raztopina, s katero je kolona predhodno uravnotežena.
Katera od naslednjih tehnik kromatografije se lahko uporabi za razsoljevanje beljakovin?
Kot že omenjeno, je mogoče filtracijo z gelom učinkovito uporabiti za beljakovinerazsoljevanje in se doseže tako, da se kolona za gel filtracijo najprej uravnoteži z vodo. Vendar pa se izmenjava pufra izvede tako, da najprej uravnotežimo kolonsko smolo s ciljnim pufrom.
