Tripsinizacija je proces celične disociacije z uporabo tripsina, proteolitičnega encima, ki razgrajuje beljakovine, da loči adherentne celice iz posode, v kateri se gojijo. Ko ga dodamo celični kulturi, tripsin razgradi beljakovine, ki celicam omogočajo, da se oprimejo posode.
Zakaj poskusimo celice?
Tripsinizacija se pogosto izvaja, da se dovoli prehod celic v novo posodo, opazovanje za eksperimentiranje ali zmanjšanje stopnje konfluentnosti v bučki z odstranitvijo odstotka celice.
Kako tripsin deluje pri ločevanju celic?
Tripsin/EDTA je kombinirana metoda za ločevanje celic. Tripsin reže adhezijske proteine v interakcijah celica-celica in celica-matriks tako, da odreže aminokislino adhezijskih proteinov, posebej pri lizinu ali agininu na C-terminalu, če aminokislina v zgornjem toku ni prolin.
Kako dobite tripsinizirane adherentne celice?
postopek
- Odstranite medij iz posode za kulturo z aspiracijo in sperite monoplast z raztopino soli brez Ca2+ in Mg 2+, da odstranite vse sledi seruma. …
- Nanesite dovolj tripsina ali raztopine tripsina/EDTA v posode za kulturo, da popolnoma pokrijete monoplast celic in postavite v inkubator pri 37 °C za ~2 minuti.
Kako onemogočim tripsin v celični kulturi?
Ko se celice prikažejo ločene, dodajte 2 zvezkapredhodno segrete celotne rastne gojišča za inaktivacijotripsina. Medij nežno razpršite tako, da večkrat pipetirate po površini celične plasti, da zagotovite obnovitev >95 % celic. Za kulture brez seruma, inhibitor sojinega tripsina (št. izdelka
