Najprej tako EcoR1 kot Xba1 pustita 5' previse, ko prebavita DNK (tako kot Nde1). V obeh primerih je 3' konec vdolbine, zato lahko poliermaza doda podlage. Drugič, vse polimeraze lahko dodajajo baze samo na 3' konec, tako da bo Klenow dodal 4 baze na umaknjeni 3' konec obeh mest, da ustvari tope konce.
Ali restrikcijski encimi puščajo 5-fosfat?
Vektorji in vložki, ki jih prebavijo restrikcijski encimi, vsebujejo potrebne končne modifikacije (5' fosfat in 3' hidroksil), medtem ko fragmenti, ustvarjeni s polimerazno verižno reakcijo (PCR), morda ne.
Ali je mogoče povezati tope konce?
Ligacija topega konca
Ligacija topega konca ne vključuje baznega seznanjanja štrlečih koncev, zato je kakršen koli topi konec lahko povezan z drugim topim koncem. Tope konice lahko povzročijo restrikcijski encimi, kot sta SmaI in EcoRV.
Ali Taq polimeraza proizvaja tope konce?
Da… Taq Polymerase doda A-previsi, če ohranite končni korak razširitve pri 72 dC na PCR. Večinoma se uporablja za kloniranje TA.
Zakaj uporabljati Klenow fragment pri sekvenciranju DNK?
Klenow fragment je izjemno uporaben za raziskovalne naloge, kot so: Sinteza dvoverižne DNK iz enoverižnih predlog . Zapolnitev umaknjenih 3-palčnih koncev fragmentov DNK, da naredimo 5-palčni previs topi . Prebava štrlečih 3' previsov.
