Večja kot je molekulska masa, daljša je tuljava in počasneje gre molekula. Torej, elektroforeza + SDS se loči na podlagi molekulske mase, ne na podlagi naravnega naboja. Pomembna opomba: beljakovin enake dolžine običajno ni mogoče ločiti z gelsko elektroforezo + SDS.
Kako ločite beljakovine enake molekulske mase?
Centrifugiranje, elektroforeza in kromatografija so najpogostejše tehnike za čiščenje in analizo beljakovin. Centrifugiranje ločuje beljakovine na podlagi njihove stopnje sedimentacije, na katero vplivata njihova masa in oblika.
Katere tehnike ločujejo beljakovine na podlagi polnjenja?
Beljakovine je mogoče ločiti na podlagi njihovega neto naboja z ionsko izmenjevalno kromatografijo. Če ima beljakovina neto pozitiven naboj pri pH 7, se običajno veže na kolono kroglic, ki vsebujejo karboksilate skupine, medtem ko negativno nabit protein ne bo (slika 4.4).
Katera od naslednjih tehnik je najbolj primerna za ločevanje beljakovin na podlagi molekulske mase?
Metode kromatografije, ki temeljijo na particiji, so zelo učinkovite pri ločevanju in identifikaciji majhnih molekul, kot so aminokisline, ogljikovi hidrati in maščobne kisline. Vendar pa so afinitetne kromatografije (tj. ionsko izmenjevalna kromatografija) učinkovitejše pri ločevanju makromolekul kot nukleinskih kislin in beljakovin.
Katera vrsta stolpcakromatografija ločuje beljakovine na podlagi molekulske mase?
Gel filtracijska (GF) kromatografija ločuje beljakovine izključno na podlagi molekularne velikosti. Ločitev je dosežena z uporabo porozne matrice, do katere imajo molekule zaradi steričnih razlogov različne stopnje dostopa – to pomeni, da imajo manjše molekule večji dostop in večje molekule so izključene iz matrice.
